MagVigen™ – Poly T mRNA Select

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mag vigen mRNA選擇納米顆粒是信使RNA純化的理想選擇。mag vigen mRNA選擇納米顆粒可從總RNA中高效回收聚腺苷酸尾信使RNA。短時間孵育后，mRNA被MagVigen mRNA選擇納米顆粒捕獲。產(chǎn)生的納米顆粒-聚(A) mRNA復合物可以用磁鐵從樣品的其余部分中分離出來。保留的mRNA材料可以從納米顆粒上切割下來，用于產(chǎn)生測序文庫。

mag vigen mRNA選擇納米顆粒能夠從總RNA中純化poly(A) mRNA。它們可用于逆轉錄、RNA探針和RNA文庫構建。純化的mRNA產(chǎn)物可以通過凝膠電泳、PCR定量和測序進一步分析。

產(chǎn)品內容

:

• cat # 61004:MagVigen mRNA選擇納米顆粒

3毫升，1毫克/毫升，結合能力高達10-20微克mRNA，或高達300皮摩爾熒光團標記的聚A26 每毫升。

Cat# K61004還包括:

• 成塊緩沖區(qū)
• 結合緩沖液
• 洗滌緩沖液
• 洗脫緩沖液

所有材料應儲存在4°c下。

保質期:6個月

所需材料

• 去離子水。

注意:

有效捕獲mRNA所需的納米顆粒的量取決于起始材料中多聚(A)尾mRNA的濃度。

通常，每100μg總RNA使用100μl MagVigen mRNA選擇納米顆粒。

重要提示:使用前一定要重新懸浮納米顆粒。

mRNA捕獲協(xié)議

結合mRNA

1. 從儲存中取出MagVigen mRNA選擇納米顆粒，并將其置于室溫。




2. 使用前，渦旋MagVigen DNA Select納米顆粒10秒鐘。

注意: 確保珠子全重新懸浮并充分分散。

3. 取出100μl MagVigen mRNA選擇納米顆粒，放入干凈的1.5ml微量離心管中。




4. 使用磁性架收集mag vigen mRNA選擇納米顆粒，棄去上清液。

注意: 在微量離心管的側面應該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉淀物。

5. 將納米顆粒重新懸浮在200μl封閉緩沖液中，并在室溫下孵育10分鐘。




6. 使用磁性架收集mag vigen mRNA選擇納米顆粒，棄去上清液。




7. 將納米顆粒重新懸浮在200μl結合緩沖液中。




8. 向mag vigen mRNA選擇納米顆粒中添加RNA樣品。




9. 渦旋或吸取反應溶液，以充分混合。

注意: 在捕獲反應期間不引入氣泡是理想的。

10. 在室溫下孵育MagVigen mRNA選擇納米顆粒-RNA反應30分鐘。




11. 孵育后，使用磁鐵架從溶液中分離捕獲mRNA的納米顆粒。




12. 用移液管小心移去上清液，確保不要干擾捕獲mRNA的納米顆粒沉淀。

洗滌mRNA

13. 將納米顆粒重新懸浮在200μl洗滌緩沖液中，并在室溫下放置2分鐘。




14. 使用磁鐵架將捕獲mRNA的納米顆粒從洗滌液中分離出來。小心取出并丟棄上清液。。




15. 重復步驟13-14，總共進行兩次清洗。

洗脫mRNA

16. 通過添加20μl洗脫緩沖液，從納米顆粒中洗脫捕獲的mRNA。

注意: 可以根據(jù)需要調節(jié)洗脫緩沖液的體積。

17. 輕輕吸移至混合均勻，并在室溫下孵育5分鐘。

注意: 理想的是在洗脫反應過程中不引入氣泡。

18. 旋轉幾秒鐘以收集溶液。




19. 將試管放在磁性架上1分鐘，以將納米顆粒與洗脫的mRNA分離。




20. 將含有mRNA產(chǎn)物的上清液轉移到干凈的試管中。確保不要弄亂顆粒。純化的mRNA現(xiàn)在準備用于隨后的評估。

MagVigen™ – Poly T mRNA Select