流式細(xì)胞分析是一項實(shí)驗室細(xì)胞分析技術(shù)。回顧流式細(xì)胞分析基本概念、免疫檢測方法、流式細(xì)胞分析方案主要步驟和適當(dāng)?shù)膶φ沼兄诖_保流式細(xì)胞分析的準(zhǔn)確性。后文提供了一些有助成功開展流實(shí)驗的要點(diǎn)。

一、什么是流式細(xì)胞分析

流式細(xì)胞分析是一種可根據(jù)細(xì)胞物理和熒光特性，鑒定和/或分選異質(zhì)懸浮細(xì)胞群的強(qiáng)大技術(shù)。這是一種單細(xì)胞分析方法，非常適合同時獲取大量細(xì)胞的單細(xì)胞水平定量信息，包括給定類型細(xì)胞數(shù)目和細(xì)胞內(nèi)特定蛋白含量。

流式細(xì)胞分析的部分優(yōu)勢包括快速、可在研究異質(zhì)細(xì)胞群時區(qū)分不同細(xì)胞亞群的差異，同時支持分析異質(zhì)性細(xì)胞群的亞群。流式細(xì)胞分析常用于免疫分型和免疫腫瘤學(xué)研究，可分析血液、骨髓和其他樣品類型的血液學(xué)差異。

二、流式細(xì)胞分析工作原理

流式技術(shù)依靠流體動力聚焦技術(shù)使細(xì)胞懸液樣品形成一股單細(xì)胞液流，通過激光束。根據(jù)細(xì)胞對入射光線的散射情況，可每秒數(shù)千顆粒的速率，檢測細(xì)胞大小和胞內(nèi)復(fù)雜情況。隨后即將生成的模擬數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)，進(jìn)行定量和繪圖分析。

根據(jù)流式細(xì)胞測定結(jié)果，可確定特定的細(xì)胞群和其亞群并通過細(xì)胞分選法物理分離，此時會根據(jù)細(xì)胞的熒光特性控制其電荷大小，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞顆粒的靜電偏轉(zhuǎn)。如需更精細(xì)地鑒定亞群，則要使用探針。貼壁細(xì)胞和實(shí)體組織成功分離并制成單細(xì)胞懸液后，也可采用該技術(shù)進(jìn)行分析。

三、傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀組件

關(guān)于流式細(xì)胞分析的低配置，即使是最基礎(chǔ)的單激光流式細(xì)胞儀，一般都會配置至少同時檢測4種熒光染料的濾光片。目前，單次實(shí)驗中最多甚至可區(qū)分18種波長的光線。

傳統(tǒng)流式細(xì)胞組件包括：

1.用于樣品處理和細(xì)胞分選的液流系統(tǒng)

流動室：樣品中的細(xì)胞通過流體動力學(xué)聚焦并流經(jīng)激光照射區(qū)。

2.用于熒光檢測的光學(xué)系統(tǒng)

光通過一系列鏡片和濾光片。

根據(jù)大小、內(nèi)部復(fù)雜成分和信號強(qiáng)度檢測細(xì)胞。

3.用于信號處理、計算機(jī)顯示和分析的電學(xué)系統(tǒng)

光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)換為電信號。

信號隨后放大和數(shù)字化。